高迎春1，张传津1，徐恩民1，陆庆泉1，冯涛1，李淑花1，都业良2
(1.山东省兽药质量检验所，山东 济南 250022
2.青岛农业大学，山东 青岛 266109)

微生物污染的监控（微生物限度检查）是兽药质量安全性评价的重要指标，制剂微生物限度检查是兽药安全使用的重要保障。《中国兽药典》二OO五年版一部完全参照相应版本的《中国药典》确定的微生物限度标准[1-2]。众所周知，动物的用药方式与人的有很大区别。首先，动物大部分的给药方式是群体给药，给药途径多是饮水和拌料。其次，动物的生存环境较人的也有很大的差距，环境中的微生物不可避免的会随饮水、拌料以及动物自身摄取进入动物的体内。同时，根据兽药GMP的要求，兽药不同剂型生产环境控制也不同。因此，如何科学客观地确定兽药微生物限度标准成为了目前兽药药检工作者的主要研究课题之一。
本试验对山东省兽药GMP企业生产的粉散剂、颗粒剂产品的微生物污染状况进行广泛地抽样调查检测，在此基础上，对兽药中实际存在的微生物对动物健康的影响以及兽药被微生物污染后对临床疗效的影响做进一步的研究和探讨，为摸清实际生产中不同剂型兽药的污染水平，制订符合中国国情的兽药微生物限度标准提供一定的参考。
1  兽用内服给药制剂中微生物污染程度调查检测
1.1调查范围
山东省兽药粉剂/散剂/预混剂、颗粒剂车间通过GMP企业中具有代表性的大、中、小型企业各10家2007年下半年至2008年3月生产的相关品种兽药。
1.2抽样时间
2008年3月-5月。
1.3抽样方法及数量
根据兽药管理条例、农业部6号令的抽样规定，从企业仓库随机抽样，共抽查256批，其中粉散剂/预混剂130批（可溶性粉65批、预混剂35批、中药散剂30批）、中药颗粒剂126批。
1.4检测方法
参照《中国兽药典》二OO五年版一部附录中微生物限度检查法。
1.5检测结果
1.3.1中药颗粒剂微生物限度检查结果  126批颗粒剂微生物限度检查结果表明，细菌数平均值：412cfu/g；霉菌和酵母菌数平均值181cfu/g;大肠杆菌阳性检出率67.5%。
1.3.2 粉剂/预混剂微生物限度检查结果  100批粉剂/预混剂检查结果表明，95.4%样品细菌数＜1cfu/g；76.9%的样品霉菌和酵母菌数＜1cfu/g；大肠杆菌阳性检出率4.6%。
1.3.3 中药散剂微生物限度检查结果  30批中药散剂检查结果表明，细菌数平均值：8.57×105cfu/g；霉菌和酵母菌数平均值9.70×103cfu/g;大肠杆菌阳性检出率100%。
1.6分析讨论
由以上微生物限度检查结果可以看出，不同剂型的兽药制剂虽然同为内服制剂，但微生物污染水平差异较大。影响因素分析如下：
1.4.1各类制剂不同生产环境的影响  同为中药制剂，中药颗粒剂生产环境是在30万级或在10万级生产车间生产的，中药散剂是在一般区域条件下生产的，显然洁净区微生物污染水平明显低于一般区域。
1.4.2药物本身抑菌活性的影响  粉剂、颗粒剂、散剂三个剂型微生物限度检查结果表明，西药粉剂/预混剂这类产品由于大部分药物本身具有较强抑菌或杀菌活性，且有的产品是广谱抗菌素，虽然这类药物是在一般区域生产的（中药颗粒剂生产环境是10万级或30万级），但它不利于微生物增殖生长；而大部分中药本身抗菌活性较差，所以西药粉剂微生物检测结果数值显著低于中药散剂、中药颗粒剂。 
1.4.3不同制剂工艺的影响：虽然中药颗粒剂、散剂同为中药制剂，但中药颗粒剂的生产工艺由于要经过提取、浓缩、烘干等加工过程，无疑起到一定的杀菌作用，从而减少了微生物的污染。
综上所述，虽然同为内服给药制剂，但微生物污染水平结果差异显著，《中国兽药典》二OO五年版仅根据给药途径制订微生物限度控制标准已无法有效控制兽药卫生质量。
2  不同染菌量对健康动物的影响试验
2.1  材料与方法
2.1.1